Membuat biakan murni Acetobater xylinum

       Biakan murni bakteri A. xylinum dapat diperoleh di Balai-Balai Penelitian Kimia. Biakan murni ini kemudia ditumbuhkan dalam suatu media. Dari media ini nantinya akan diperoleh biakan starter yang dapat digunakan untuk mengokulasi air kelapa. Komponen-komponen media yang diperlukan dapat dilihat pada Tebel di bawah ini. Beberapa komponen ini ada yang harus dibeli di toko-toko kimia, karena tidak dijual bebas di pasaran.

       Salah satu media untuk pertumbuhan bakteri Acetobater xylinum adalah “yeast extract agar”. Media ini dibuat dari:

Yeast extract agar             0,2504  gram

K₂HPO₄/KH­­₂PO₄                    0,50/3908 gram

MgSO₄                             0,0640 gram

Gula pasir/sararosa           10 gram

Agar-agar                         2 gram

Air kelapa                         100 ml

Cara pembuatan:

1.  Komponen-komponen pada tabel di atas ditimbang dan dicampur, kemudian diencerkan dengan air yang bersih. Untuk mempercepat larutnya bahan-bahan tersebut, perlu dilakukan pemanasan.

2.  Kemudian larutan didinginkan dan ditambah asam cuka sampai pH mencapai 4,5. Selanjutnya disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 derajat celsius. Tekana 15 lbs selama 15 menit. Kalau alat ini tidak tersedia, dapat juga diganti dengan alat lainnya (misalnya dandang). Dalam keadaan masih panas dimasukkan ke dalam botol (tabung reaksi) steril dan didiamkan miring sampai beku. Media beku ini disebut media agar miring.

3.  Diinokulasi dengan biakan murni bakteri Acetobacter xylinum. Jumlah yang digunakan sekitar dua mata ose (dawai), yaitu dengan cara menggoreskannya di atas permukaan media secara berliku-liku (zig-zag). Kemudian dibiarkan pada suhu kamar selama 5 hari. Setelah itu bakteri akan tumbuh di atas permukaan media agar. Supaya tetap hidup, biakan murni A. xylium harus dipindashkan setiap 1 bulan sekali ke dalam media yeast extraxt agar yang baru, dengan seperti di atas.